Panel设计
Overview
多色流式细胞仪是一种强大的技术，能够在单细胞水平同时分析多个标记物。随着可检测参数数量的增加，多色检测实验配色方案的设计可能具有挑战性，需要了解可能影响panel性能的几个因素：
- 生物学——抗原密度和抗原共表达
- 荧光染料——亮度和溢出
- 仪器——配置和设置
- 在交互式细胞图谱探索预设panel
步骤1
定义您的实验假设
定义您的实验假设是panel设计的第一步，开始识别：
- 您试图获得的生物信息
- 您希望询问的细胞群
- 是否在细胞表面或细胞内发现靶点
观看流式细胞仪panel设计步骤1视频，开始您的panel设计过程。
步骤2
标记物选择
在panel设计过程的第二步中，您将需要确定为识别感兴趣细胞群所需的标记物及其数量。
请注意：
- 标记物表达水平
- 一级抗原：以高密度表达，通常定义细胞谱系
- 二级抗原：通常在一个连续体上表达
- 三级抗原：以低密度表达的关键标记物
- 标记物共表达，尤其是暗淡标记物
- 识别您希望询问的细胞群所需的门控策略
观看流式细胞仪panel设计步骤2视频，了解识别关键细胞群和选择所需标记物进行分析的复杂性。
步骤3
了解您的流式细胞仪
了解您的仪器至关重要，了解仪器配置可以让您知道仪器可以检测多少标记物和哪些荧光染料。
需要考虑的因素包括：
- 用于激发的激光波长
- 每种激光的检测器数量
- 可用于检测荧光染料的过滤器
观看流式细胞仪panel设计步骤3视频，了解并最大程度地发挥流式细胞仪的功能，以实现最佳的panel设计。
步骤4
荧光染料分配
仔细选择荧光染料，以分辨所有表达水平的标记物，并尽量减少光谱重叠。考虑使用荧光分辨率排序和光谱查看器等工具来帮助评估：
- 荧光分辨率
- 交叉激光激发
- 荧光溢出
记住将明亮的荧光染料与低表达抗原配对，将暗淡的荧光染料与高表达抗原配对。记住传播只影响共表达标记物的分辨率。
观看流式细胞仪panel设计第4步视频，学习最佳panel设计的荧光染料和抗原匹配策略，以获得最佳的panel设计。
步骤5
检查panel
检查panel设计并开始订购试剂。记住您滴定的质量浓度试剂，并优化染色方案。包括补偿的适当对照、FMO和生物对照，以帮助确保最佳的panel性能。
下载 “流式细胞仪panel设计流程” 信息图，找到更多panel设计技巧和一些有趣信息。
Videos
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Resources
1类激光产品。
仅供研究使用，不用于诊疗程序。